熊亚红 苏健鸿 刘小平

（华南农业大学理学院生物材料研究所，广东广州 510642）

摘要：采用邻苯二甲酸酐（PA）对猪胰脂肪酶（PPL）进行了化学修饰，以三硝基苯磺酸法测定修饰酶的平均氨基修饰度，并比较了酶修饰前后的紫外光谱和荧光光谱；采用动力学方法考察了酸碱和热对修饰酶水解活性和稳定性的影响，并计算了一系列动力学和热力学参数。实验结果表明： PA对PPL的修饰度为30%，脂肪酶PPL经PA修饰后，其紫外特征吸收峰发生红移，吸收强度降低，而且最大荧光发射峰发生蓝移，荧光强度增大；PPL经PA修饰前后，催化水解反应的最适pH和最适温度未发生变化，仍为pH7.5和40℃，但修饰后酶催化水解的效率和酶与底物的亲和力得到有效提高，反应的活化能E_a、自由能ΔG^≠、活化焓ΔH^≠及活化熵ΔS^≠均明显降低，如最适条件下修饰酶PA-PPL和脂肪酶PPL的转化数k_cat和反应的活化能E_a分别为39.8s^-1、25.8 kJ/mol和34.4s^-1、43.8kJ/mol；PPL经PA修饰后，酶分子热变性的热力学参数（变性活化能E_a,d、变性自由能、变性活化焓及变性活化熵）均增大，半衰期t_1/2延长，酶分子的热稳定性也得到有效提高。

关键词：脂肪酶；化学修饰；稳定性；动力学；热力学参数；

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《分子催化》，2010, 24（5）：435~442